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雙縮脲法蛋白含量測試盒?操作過程

更新時間:2021-12-01點擊次數:1042

雙縮脲法蛋白含量測試盒操作過程:

一、粗酶液提?。?/p>

1.組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。2.血清或培養(yǎng)液:直接測定。 3.細菌、真菌:按照細胞數量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。

二、測定操作: 1.分光光度計預熱30min,調節(jié)波長到680nm,蒸餾水調零。2.試劑二、試劑三和試劑四置于30℃水浴保溫30min。 3.對照管:取一支EP管,加入100μL粗酶液,200μL試劑二,混勻后置于30℃水浴保溫10min;加入200μL試劑三,混勻后8000g,4℃離心10min;取200μL上清液,加入新的EP管,再加入1000μL試劑四,200μL試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A對照管。 4.測定管:取一支EP管,加入100μL粗酶液,200μL試劑三,混勻后置于30℃水浴保溫10min;加入200μL試劑二,混勻后8000g,4℃離心10min;取200μL上清液,加入新的EP管,再加入1000μL試劑四,200μL試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A測定管。(注意與空白管不同,先加試劑三,后加試劑二) 5.空白管:取EP管,加入200μL蒸餾水,1000μL試劑四,200μL試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A空白管。 6.標準管:取EP管,加入200μL標準品,1000μL試劑四,200μL試劑五,混勻后置于30℃水浴保溫20min,于680nm測定光吸收,記為A標準管。注意:空白管和標準管只需要測定一次。

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